材料與方法

　　2.1試驗(yàn)條件與材料

　　2.1.1 試驗(yàn)條件

　　該研究在北京林業(yè)大學(xué)花房外的空地中進(jìn)行，挑選大小一致、整齊健壯的植株材料（同第二章），每種10株，于2005年5月10日栽種于花盆中，盆高30cm，上口徑35cm，下口徑30cm，培養(yǎng)土配比為1園土：1草炭：1沙子：1有機(jī)肥。在生長(zhǎng)期間給予正常的管理，7月12日把每個(gè)品種分為兩個(gè)處理，每種處理（對(duì)照）5盆重復(fù)樣本，混合取樣，每個(gè)指標(biāo)測(cè)定3個(gè)重復(fù)。

　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料

　　蛇莓（Duchesnea indica ）多年生草本，全株有柔毛；匍匐莖長(zhǎng)。 3出復(fù)葉，基生葉的葉柄長(zhǎng)6-10多厘米，莖生葉的葉柄長(zhǎng)1-7厘米；小葉片菱狀卵形或倒卵形，長(zhǎng)1.5-4厘米，寬1-3毫米，兩側(cè)小葉片較小，基部偏斜，邊緣有鈍鋸齒，兩面散生柔毛或表面近于無毛；托葉卵狀披針形，有時(shí)有缺刻狀分裂�；�黃色，單生葉腋，直徑1-2厘米；副萼片頂端3-5齒裂，通常3齒裂；花瓣幾與副萼片或萼片等長(zhǎng)。聚合果近球形或長(zhǎng)橢圓形，直徑1－1.5厘米，暗紅色，外包宿存萼片�；ㄆ�4月，果期5月。

　　連錢草（Glechoma hederacea）多年生草本。莖細(xì)，方形，被細(xì)柔毛，下部匍匐，上部直立。葉對(duì)生，腎形至圓心形，長(zhǎng)1.5～3cm，寬1.5～5.5cm，邊緣有圓鋸齒，兩面有毛或近無毛，下面有腺點(diǎn)；葉柄長(zhǎng)為葉片的1～2倍。輪傘花序腋生，每輪2～6花；苞片刺芒狀；花萼鐘狀，長(zhǎng)7～10mm，萼齒狹三角狀披針形，頂端芒狀，外面有毛和腺點(diǎn)；花冠2唇形，淡藍(lán)色至紫色，長(zhǎng)1.7～2.2cm，下唇具深色斑點(diǎn)，中裂片腎形；雄蕊4，藥室叉開。小堅(jiān)果長(zhǎng)圓形，褐色。花期3～4月，果期4～6月。

　　匍枝委陵菜（Potentilla flagellaris）多分枝，匍匐莖發(fā)達(dá)，分節(jié)出相對(duì)著生不定根與不定芽，與土壤接觸后迅速生長(zhǎng)；掌狀復(fù)葉，小葉5枚，菱狀倒卵形，淺綠色，花單生，花瓣多5枚，黃色，花莖約2cm，著生于葉腋處；花期為3至11月。

　　匍枝毛茛（Ranunculus repens）多數(shù)草本,少數(shù)為小灌木或木質(zhì)藤本。多數(shù)植物的主根早萎,由莖基部生出須狀不定根。單葉或復(fù)葉,互生或基生,稀對(duì)生;葉脈掌狀,稀羽狀。聚傘花序或由聚傘花序組成各式花序,稀總狀花序。

　　2.2試驗(yàn)方法

　　自然干旱處理和澆水處理，在試驗(yàn)前3d對(duì)所有植株進(jìn)行連續(xù)澆水處理，使每盆土壤都處于飽和含水狀態(tài)，之后對(duì)澆水處理的植株2－3d進(jìn)行澆水，使其不受水分脅迫。脅迫期間外部條件與自然條件一致，當(dāng)下雨時(shí)用透明塑料布進(jìn)行遮擋，使其不受雨水影響。對(duì)蛇莓、連錢草、匍枝委陵菜于脅迫0、6、11、16、24、31、38d取樣（蛇莓取樣至第31d）。在預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)匍枝毛茛的耐旱性與其他三種植物相比較弱，所能耐的脅迫周期短，因此取樣的時(shí)間也不同，分別在脅迫第0、3、6、9、12、15、17d。取樣時(shí)間為早上7點(diǎn)，取樣方法為在每種處理5盆中選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的成熟葉片，混合取樣。測(cè)定指標(biāo)包括土壤含水量、葉片相對(duì)含水量、細(xì)胞膜透性、丙二醛、可溶性糖、脯胺酸含量、光合色素的測(cè)定。

　　2.2.1相關(guān)生理指標(biāo)測(cè)定方法

　　(1)膜相對(duì)透性（電導(dǎo)率）的測(cè)法：采取功能葉片，流水沖洗，再用蒸餾水沖洗3次，濾     紙吸干，用手持打孔機(jī)打成直徑0.3cm的小圓片，每個(gè)試管中放10片，3個(gè)重復(fù)。后在試管中注入15ml蒸餾水，用循環(huán)真空泵抽氣3次，室溫靜置0.5h,測(cè)定電導(dǎo)值R；再將試管置入廢水浴中煮沸20min,測(cè)定殺死對(duì)照電導(dǎo)值R0,計(jì)算膜相對(duì)透性（電導(dǎo)率）。

　　計(jì)算公式：R／R0×100﹪

　　(2)脯氨酸含量測(cè)定：采用酸性茚三酮法（李合生，2000）。選取植株成熟葉片0.2g，加入5ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3﹪的磺基水楊酸溶液，研磨提��；勻漿液轉(zhuǎn)讓離心管中，沸水浴中浸提10min，冷卻后以5000r／min離心10min；吸取上清液2ml，加入2ml冰乙酸和4ml酸性茚三酮顯色液，于沸水浴中加熱30min，冷卻；加入5ml甲苯，充分振蕩，靜置分層后吸取上層紅色甲苯層，以甲苯為對(duì)照，在520nm波長(zhǎng)下比色，計(jì)算脯氨酸含量。樣品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)=X×V/W,X:通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求出的2ml測(cè)定液中脯氨酸的濃度（ug/g）,V:提取液得總體積5ml,W:樣品鮮重0.2g。

　　(3)丙二醛的測(cè)量：取葉片0.2g，加入少量石英砂，用6ml 5%三氯乙酸（TCA）冰浴研磨，4 ℃下5000r/min離心10分鐘。取上清液2ml，加入2ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.67%得硫代巴比妥酸(TBA)，(對(duì)照為2ml蒸餾水+2mlTBA)混勻，在沸水浴上反應(yīng)20分鐘，迅速冷卻后，取上清液測(cè)定其在450、532、600nm下的吸光值，按照公式MDA含量（umol/g）=[6.45×(A532-A600)-0.56×A450] ×V/W,同時(shí)也可計(jì)算出可溶性糖的含量（mmol/g）=11.74×A532×V/W。其中V為研磨液的體積6ml，W為樣品鮮重0.2g。

　　(4)土壤含水量的測(cè)量：在同一處理的5個(gè)盆中各用打孔器鉆取盆中10cm深的土壤，后于鋁盒中混勻，三個(gè)重復(fù)，稱鮮重；在80℃下烘干24小時(shí)，稱干重。土壤含水量（%）=（W1-W2）/（W1-W）×100％。W1為土壤鮮重，W2為土壤干重，W為鋁盒自重。

　　(5)葉片相對(duì)含水量（RWC）和水份飽和虧缺（WSD）的測(cè)定：采集后，用蒸餾水清洗葉片，濾紙吸干表面浮水，后將葉片剪成0.5cm2的小塊，每個(gè)重復(fù)10片，三個(gè)重復(fù)，稱取鮮重（Wf），放入小燒杯中吸水24h后稱取飽和重（Wt），然后將葉片放入80℃烘箱24h后稱 取干重（Wd）。RWC(％)＝（Wf-Wd）/（Wt－Wd）×100％,WSD(％)= （Wt-Wf）/（Wt－Wd） ×100％。